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双光子荧光寿命计数系统
双光子荧光寿命光子计数系统 Ultima 2P Plus
双光子荧光寿命光子计数系统 Ultima 2P Plus
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Bruker推出了新的Ultima 2PPLUS荧光计数系统,该系统具有更大视野设计、优异的光子探测能力并且能够进行同步3D全息光刺激和探测。这一设计是Bruker与神经科学领域研究者们深度合作的结果。该荧光计数系统将推进创新性研究项目,并为前沿研究开辟新的道路。

Bruker荧光计数仪器部门的前身——原Prairie Technologies公司,在十多年前推出了Ultima双光子系统,该系统能够进行谷氨酸光解笼操作并同时进行荧光探测。如今,Bruker 继往开来,在荧光检测和全息图像处理领域取得了进展,并将这些技术集成于更新的Ultima 2PPLUS系统。

(左图)5A层神经元中GCaMP6和受限神经元胞体C1V1-mRuby2的共表达。活体荧光探测,探测深度位于软脑(脊)膜以下约400μm,使用波长为920nm   和765nm。图像由伦敦大学学院 Michael Husser实验室的Dustin Herrmann和Mehmet Fisek提供。


Ultima 2PPLUS系统亮点


Ultima 2PPLUS

Ultima 2PPLUS采用模块化设计,系统支持升级,可根据您的研究需求进行升级。


配备Neuralight 3DTM空间光调制器模块的Ultima 2PPLUS


  具备同级别更大的探测视野并提供优异的视野均匀性


Ultima 2PPLUS的视野数为28mm,与标准的18mm视野对比。


现代光遗传学实验通常需要对样品中相距较远的不同区域进行光刺激并同时进行荧光探测。Ultima  2PPLUS将探测视野增大为标准视野的50%以上,以满足现代光遗传学实验的需求。系统采用更新的定制化光学设计,在全域保持空间和时间分辨率,从而保证研究人员能够在不改变实验设计的情况下继续他们的研究工作。


通过玻璃颅窗对皮层进行大视野双光子荧光探测。


  

小鼠视觉皮层5A层神经元的GCaMP6表达,探测深度位于软脑(脊)膜以下约400μm。以上图像均使用Nikon 16x 0.8NA物镜采集,探测波长为920nm。比例尺为200μm。图像由伦敦大学学院 Michael Husser实验室的Dustin Herrmann和Mehmet Fisek提供。


高灵敏度深层荧光探

Ultima 2PPLUS的荧光探测光路能够确保几乎所有的从暗淡的、深层和不透明生物样品中散射的光子都能被探测到。这一优异的光子收集效率源于荧光探测光路的2英寸大口径设计和缩短的探测器光路设计。 Ultima 2PPLUS 还兼容三光子荧光探测, 可以对样品进行更深层的荧光探测。

第5层椎体细胞的3D视图。数据采集自一月龄Thy1-YFP-H转基因小鼠,通过玻璃颅窗进行荧光探测。图像由纽约大学医学院的GuangYang提供。


使用ETL聚焦模块采集的立体堆栈3D视图。活体小鼠视觉皮层5B层神经元,采用tdTomato标记。比例尺100μm。图像由伦敦大学学院 Michael H?usser实验室的Lisa Bauer, Dustin Herrmann和Mehmet Fisek提供。


同步3D全息光刺激和荧光探测


Ultima 2PPLUS使复杂的光遗传学实验成为可能。利用计算机生成全息图,通过Neuralight 3DTM空间光调制器模块进行控制,可以在多个焦平面上对大量目标同时进行光刺激。在3D全息实验中,处于不同深度的目标可通过定制设计的具有光学校正的ETL聚焦模块进行荧光探测。ETL模块可将荧光探测平面与光刺激平面沿Z轴方向分离。


使用Neuralight3DTM 对圆圈中的细胞进行光刺激。首先生成对应点的三维全息图,然后通过螺旋扫描覆盖被刺激的神经元细胞体。图像由伦敦大学学院Michael H?usser实验室的Adam Packer, Lloyd Russell和Henry Dalgleish 提供。


技术参数:


扫描单元


扫描方式

一对6mm Cambridge扫描振镜

视野范围

使用16x物镜时:~1.375μm x ~1.375μm (更大视野数28mm

扫描速度

标准点扫描: 1.65 /秒(512 x 512像素); >12 /秒(64 x 64像素) 螺旋点扫描: 6 /秒(512 x 512像素); ~30 /秒(64 x 64像素)

用户自定义扫描

用户自定义直线、曲线、环形(无限)扫描;用户自定义线的像素密度和单次扫描中线的数量(1-2048);1倍到

128倍缩放;360度旋转;单点扫描

光刺激模块

独立的3mm6mm Cambridge振镜组,提供双光子和单光子激光光斑的准确定位

高速扫描模块

8kHz 共振扫描振镜;~30 /秒(512 x 512像素), >1300 /秒(512 x 8像素)

探测器


反射NDD探测器

1个到4个人工挑选的Hamamatsu多碱阴极PMT;可升级到Hamamatsu GaAsP PMT

透射NDD探测器

1个到2个人工挑选的Hamamatsu多碱阴极PMT;可升级到Hamamatsu GaAsP PMT

Dodt

透射光Dodt梯度相差模块(包含一个Hamamatsu PMT),可提供DIC类似成像能力

透射光探测器

一个Hamamatsu多碱阴极PMT

相机

提供标准C-mount接口

光路入口


飞秒激光

针对多光子激光优化的光路,输入波长范围:690 - 1700 nm

落射荧光

高功率LED光源

可见光激光

可见光激光采用光纤导入

Ultima激光等级

Class 1 (包含Class 3bClass 4激光)

Helios激光等级

Class 3b

LED

全视野光激活

电动控制


可变高度XY载物台

可变高度;X行程~15 cmY行程~7.5 cm,步进~0.3μm

XY电动底座

用于移动机体的带粗调、细调的移动平台,行程~35 mm,步进 0.1um

Z轴电动聚焦

行程30mm步进~0.2μm

Z轴压电陶瓷

行程1000μm步进0.05μm

全角度物镜转盘

全电动控制物镜的角度和旋转

软件


Prairie View

6维扫描(XYZT λ P),可定制化

Z-Series

用户可自定义切片数量、厚度以及激光功率

T-Series

用户可自定义Time Lapse实验设计,可与其它成像模块连用并可用外部信号触发图像采集

拼接大图拍摄

2D3D拼接大图拍摄进行了优化

外围设备整合

可整合多个外围设备

光激活

用户自定义光激活点和区域

ROI

用户自定义扫描区域和形状

亮度时间分析

用户可自定义扫描区域,采集和绘制不同时间点的亮度信息

信号输入输出

可控制电生理实验中的信号输入和输出,刺激控制,并可与外部和内部设备同步




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