骨和牙齿组织受丰富的感觉和交感神经元支配。然而，到目前为止，对支配硬组织的神经的形态学、分子表型和分布的描述大多局限于薄的组织学切片。由于在三维重建过程中丢失了重要的结构信息，这种方法不能充分捕获分散的神经元投影。在这篇文章的研究中，作者优化了组织透明化免疫标记三维成像的方法(iDISCO/iDISCO+)，对灌注C57BI/6小鼠全股骨和下颌骨的高分辨率神经元结构进行成像。用针对PGP9.5（泛神经元标记）、CGRP或酪氨酸羟化酶（交感神经元标记）的抗体对轴突及其神经末梢进行免疫标记。使用光片荧光显微镜进行三维成像。作者展示了高质量的免疫标记轴突和神经末梢的感觉和交感神经元支配小鼠股骨和下颌骨，通过完整的3D Volume跟踪它们的投影，突出它们分布范围，并显示每个骨骼和周围组织不同部位神经支配模式的区域差异，清楚地确定了可能与疼痛感有关的肽能感觉神经元的自由神经末梢。绘制感觉和交感轴突及其神经末梢在不同骨室中的分布，可能对进一步阐明它们在健康和疾病中的作用具有重要意义。在未来，探索其他重要的神经元亚群在这些以及整个身体的其他硬组织中的分布将是很有趣的。例如，牙周组织中的感觉神经元介导牙周腔中的疼痛感以及触觉和压力。

锘海自主研发LS18平铺光片显微镜可实现整鼠、小鼠全脑、心脏、脊髓、骨骼、肾脏、肝脏、乳腺、胰腺、肺、脂肪及肿瘤等小动物完整器官3D结构呈现。“平铺光片技术”解决了传统光片显微镜中空间分辨率、光学层析能力和成像视野大小之间的矛盾，满足高通量、准确定位的荧光成像分析需求。通过调整成像分辨率、速度、放大倍数等参数以及样本的处理方法，以获得微米级、亚微米级甚至百纳米级三维空间分辨率的多色组织结构信息。广泛应用于神经、发育、肿瘤、等基础生物科研领域以及药物开发、药效检测、临床病理检测等医药领域。为方便广大科研工作者，我们亦提供灌注取材、组织透明化荧光染色、平铺光片显微镜3D荧光成像、数据分析、数据存储等一站式科研服务。

图1. 改进的免疫标记成像的组织透明化方法(iDISCO/iDISCO+)实现小鼠股骨和牙齿组织的透明化。

图2. 整组织免疫标记和三维荧光成像，以可视化PGP9.5标记的小鼠股骨神经纤维及其末端。

图3. 整组织免疫标记和三维荧光成像，以可视化CGRP标记的小鼠股骨神经纤维及其末端。

图4. 整组织免疫标记和三维荧光成像，以可视化TH标记的小鼠股骨神经纤维及其末端。

图5. 整组织免疫标记和三维荧光成像，以可视化小鼠下颌骨和周围组织中PGP9.5标记的神经纤维及其末端。

图6. 整组织免疫标记和三维荧光成像，以可视化小鼠下颌骨和周围组织中CGRP标记的神经纤维及其末端。

文献链接：Using tissue clearing and light sheet fluorescence microscopy for the three-dimensional analysis of sensory and sympathetic nerve endings that innervate bone and dental tissue of mice

*使用锘海透明化系列试剂盒，锘海LS18平铺光片显微镜进行三维成像。

兔脊髓

样品尺寸：1.5 cm x 7 cm x 3 cm

*使用锘海增强型组织透明化系列试剂盒，锘海LS18平铺光片显微镜进行三维成像。

小鼠下肢骨

分辨率： 3.3 μ m x 3.3 μm x 7 μm

*使用锘海骨组织透明化系列试剂盒，锘海LS18平铺光片显微镜进行三维成像，重构股骨、膝关节和胫骨结构的细节连接。

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整体解决方案

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